Análise da expressão de genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre no patógeno humano Paracoccidioides brasiliensis
Palabras clave:
Cobre, expressão gênica e infecção, Paracoccidioides brasiliensisResumen
O fungo Paracoccidioides brasiliensis, um patógeno humano com ampla distribuição na América Latina, causa a paracoccidioidomicose quando propágulos da fase miceliana atingem os pulmões do hospedeiro. O sucesso da infecção depende da aquisição de micronutrientes essenciais como o cobre, o qual é requerido como cofator por uma diversidade de enzimas importantes em processos biológicos essenciais, tais como respiração, crescimento e aquisição de ferro. Estudos prévios demonstraram que um transportador de cobre de alta afinidade (PbCTR3) é uma molécula altamente expressa e provavelmente necessária para o estabelecimento da infecção por P. brasiliensis. No presente estudo, foram isoladas e caracterizadas as sequências genômica e do cDNA que codificam para PbCTR3 deste patógeno. O cDNA apresenta 582 pares de bases e codifica para uma proteína com 193 aminoácidos, com massa molecular predita de 21,5 kDa e pI 8.6. A sequência genômica apresenta quatro exons interrompidos por três íntrons. Análises in silico foram realizadas no banco de dados do genoma estrutural de P. brasiliensis, no qual genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre foram identificados e utilizados para a elaboração de um modelo de fatores envolvidos neste processo em P. brasiliensis. O comportamento transcricional do gene Pbctr3 e de genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre foram analisados por qRT-PCR emtempo real durante a exposição de células leveduriformes de P. brasiliensis à depleção de cobre e ferro. Foi demonstrada alteração significativa no nível de transcrição dos genes na ausência de cobre assim como na ausência combinada dos dois metais. qRTPCR em tempo real foi utilizado para analisar, em diferentes tempos, a expressão de Pbctr3 e de Pbcrp, que codifica uma proteína responsiva ao cobre, em células leveduriformes de P. brasiliensis derivadas de pulmão e baço infectados. A expressão de Pbctr3 e Pbcrp foi super-regulada durante a infecção experimental. Tomados em 78 conjunto, esses resultados sugerem a importância de Pbctr3 e do sistema de absorção cobre/ferro durante o processo infeccioso deste patógeno.
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