Caracterização de sequências codificantes para o antígeno gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase do fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis

Resumo

Um cDNA (Pbgapdh1, nº de acesso GenBank AY061958) e uma sequência genômica parcial (AF396657) codificantes para uma gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH), com massa molecular de 36 kDa, de Paracoccidioides brasiliensis, isolado Pb01 (ATCC MYA 826), foram clonados e caracterizados. O fragmento genômico foi obtido por amplificação do DNA de P. brasiliensis utilizando-se oligonucleotídeos degenerados construídos com base na sequência de aminoácidos da GAPDH deste patógeno. O fragmento obtido, de 1253 pb, apresentando identidade com GAPDHs, foi utilizado no rastreamento da biblioteca de cDNA de P. brasiliensis, fase leveduriforme. A sequência de cDNA de 1.717 nucleotídeos apresenta quadro aberto de leitura (open reading frame – ORF) de 1014 pb, codificando para uma proteína (GAPDH1) de massa molecular predita de 36 kDa, contendo os peptídeos sequenciados anteriormente. A estrutura primária de PbGAPDH foi confirmada por análises comparativas com sequências depositadas em bancos de dados. A sequência genômica parcial de 1253 pb apresenta quatro íntrons intercalados por cinco exons. A expressão de Pbgapdh1 foi analisada por meio de eletroforese bidimensional de proteínas e experimentos de Northern blot. Foi detectada uma única espécie de mRNA de 1,8 kb, preferencialmente expressa na fase parasitária do P. brasiliensis, em concordância com altos níveis de expressão da GAPDH na fase leveduriforme deste patógeno.