DETECTION OF Mycobacterium tuberculosis COMPLEX BY PCR-RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORFISM ANALYSIS OF THE HSP65 GENE

Authors

  • Eduardo Eustáquio de Souza Figueiredo Universidade Federal do Rio de Janeiro
  • Marlei Gomes da Silva Universidade Federal do Rio de Janeiro
  • Leila de Souza Fonseca Universidade Federal do Rio de Janeiro
  • Joab Trajano Silva Universidade Federal do Rio de Janeiro
  • Vânia Margaret Flosi Paschoalin Universidade Federal do Rio de Janeiro

DOI:

https://doi.org/10.5216/cab.v9i4.1381

Keywords:

Tecnologia de alimentos

Abstract

Mycobacterium bovis is a member of the M. tuberculosis complex, a group composed by species with high genetic homology. The pathogen is the etiological agent of bovine tuberculosis, an important zoonosis that is mainly transmitted by inhalation of infectious droplet nuclei or by ingestion of milk and crude milk derivative products from tuberculosis cows. The definitive identification of M. bovis, up to species level, is time consuming and difficult. In this work, the objective was to standardize a polymerase chain reaction followed by an enzyme restriction analysis in order to identify the M. tuberculosis complex in milk, without a microbiological isolation step. Reference strains and raw milk seeded with M. Bovis, were used as the starting material.  A 441pb fragment of the hsp65 gene was amplified and digested by two restriction enzymes BstEII and HaeIII. The obtained profile was used to identify the M. tuberculosis complex in milk. The minimum limit of detection of M. bovis in milk was 10CFU/mL. PRA methodology proved to be a specific and sensible method. It can be used to assist the microbiological and biochemical methods commonly used to identifying the bacilli in clinical samples, as milk 

Key word: Detection limit (PRA), Mycobacterium tuberculosis complex, milk Mycobacterium bovis, Restriction Enzyme Analysis (PCR),

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Author Biographies

Eduardo Eustáquio de Souza Figueiredo, Universidade Federal do Rio de Janeiro

Técnico em Química pelo CEFET-MT (2002). Graduado em Medicina Veterinária pela Universidade Federal de Mato Grosso (2005). Especialista em Tecnologia e Controle de Qualidade de Alimentos pela Universidade Federal de Lavras (2006). Mestre e Doutorando em Ciências (Alimentos) pela Universidade Federal do Rio do Janeiro. Tem experiência na área de Medicina Veterinária Preventiva, com ênfase em Higiene, Inspeção de Produtos de Origem Animal e Zoonoses, atuando principalmente nas seguintes areas: Segurança Alimentar, biologia molecular aplicada à detecção e identificação de patógenos em alimentos.

Marlei Gomes da Silva, Universidade Federal do Rio de Janeiro

possui graduação em Tópicos e Técnicas Avançadas Em Biologia Molecular pelo Fundação Técnico Educacional Souza Marques (1990) , especialização em Microbiologia pelo Instituto Nacional de Desenvolvimento das Ciências da Saúde (1996) , curso-tecnico-profissionalizante pela Sociedade Propagadora das Belas Artes Liceu de Artes e Ofícios (1982) , ensino-fundamental-primeiro-grau pela Escola Júlia Lopes de Almeida (1971) , ensino-fundamental-primeiro-grau pela Escola Reverendo Álvaro Reis (1974) e ensino-medio-segundo-grau pelo Colégio São Sebastão do Rio de Janeiro (1979) . Atualmente é Técnico em Laboratório da Universidade Federal do Rio de Janeiro e bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Tem experiência na área de Microbiologia , com ênfase em Microbiologia Aplicada.

Leila de Souza Fonseca, Universidade Federal do Rio de Janeiro

possui graduação em Medicina pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (1978), graduação em Farmacia pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (1970), mestrado em Ciências (Microbiologia) pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (1976) e doutorado em Ciências (Microbiologia) pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (1984). Atualmente é professor titular da Universidade Federal do Rio de Janeiro, - Memórias do Instituto Oswaldo Cruz e - Brazilian Journal of Microbiology . Tem experiência na área de Microbiologia, com ênfase em Microbiologia Aplicada, atuando principalmente nos seguintes temas: tuberculose, M. tuberculosis, aids, micobactérias e resistência.

Joab Trajano Silva, Universidade Federal do Rio de Janeiro

Graduado em Biologia Modalidade Genética pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (1986), concluiu o mestrado em Bioquímica pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (1989) e doutorado em Bioquímica pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (1996). Atualmente é professor adjunto do Instituto de Química da Universidade Federal do Rio de Janeiro, tendo sido eleito para o cargo de Vice-diretor do Instituto de Química (2004-2008) e Coordenador do Programa de Pós-graduação em Bioquímica - IQ/UFRJ (2007-2009). É orientador credenciado nos programas de Pós-graduação em Bioquímica (IQ/UFRJ) e Ciência de Alimentos (IQ/UFRJ). As principais linhas de pesquisa em que atua são: proteínas de choque térmico de Saccharomyces cerevisiae, proteínas e peptídeos bioativos e detecção de contaminantes na cadeia alimentar por técnicas de biologia molecular.

Vânia Margaret Flosi Paschoalin, Universidade Federal do Rio de Janeiro

Possui Mestrado e Doutorado em Bioquimica, sendo que o Mestrado foi realizado na Universidade de São Paulo (1982) e o doutorado na Universidade Federal do Rio de Janeiro (1989). Fez pos-doutorado em Biologia Molecular no Biotechnology Center, Cranfield University, UK. Atualmente é professor adjunto IV da Universidade Federal do Rio de Janeiro. É assessora da Diretoria Cientifica da FAPERJ (Fundacao Carlos chagas Filho de Apoio à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro), desde novembro de 2004. Foi coordenadora do Programa de Bioquimica (UFRJ) de 1999-2003, e atualmente e vice-coordenadora do Programa de Ciencia de Alimentos (UFRJ). E revisora do periodico Biotechniques.Tem projetos em colaboracao com a industria, sendo que no momento seu grupo de pesquisa possui projetos de pesquisa financiados pela Petrobras, FAPERJ, CNPq, CAPES. Tem experiência na área de Bioquímica e Tecnologia de alimentos , com ênfase em Bioquímica dos Microorganismos, atuando principalmente nos seguintes temas: clonagem, expressao de genes de interesse, purificacao e caracterizacao de proteinas recombinantes, estudo de populacoes microbianas em efleuntes de refinaria por tecnicas moleculares, identificacao e quantificacao de contaminantes da cadeia alimentar (patogenos e organismos geneticamente modificados) em alimentos industrializados por tecnicas baseadas em PCR

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Published

2008-12-21

How to Cite

FIGUEIREDO, E. E. de S.; SILVA, M. G. da; FONSECA, L. de S.; SILVA, J. T.; PASCHOALIN, V. M. F. DETECTION OF Mycobacterium tuberculosis COMPLEX BY PCR-RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORFISM ANALYSIS OF THE HSP65 GENE. Brazilian Animal Science/ Ciência Animal Brasileira, Goiânia, v. 9, n. 4, p. 1023–1033, 2008. DOI: 10.5216/cab.v9i4.1381. Disponível em: https://revistas.ufg.br/vet/article/view/1381. Acesso em: 24 nov. 2024.

Issue

Vol. 9 No. 4 (2008)

Section

Veterinary Medicine

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