Marcadores bioquímicos e morfológicos da qualidade oocitária em cadelas: papel das células do cumulus e espécies reativas de oxigênio

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Resumo

A taxa de maturação in vitro (MIV) de oócitos caninos é considerada baixa, com menos de 20 % de retomada meiótica, sendo a qualidade oocitária um fator determinante. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade oocitária de cadelas saudáveis, utilizando a viabilidade das células do cumulus (CCs), a verificação das espécies reativas de oxigênio (EROs) e a morfometria dos oócitos. Doze cadelas, com idade média de 2,3 (± 1,3) anos e com peso médio de 9,4 (± 5,2) kg, foram submetidas à ovariosalpingohisterectomia (OSH) para coleta dos oócitos. Posteriormente, foram realizados a classificação morfológica e o teste de viabilidade com Azul Cresil Brilhante (ACB) do complexo cumulus-oophorus (CCOs). Os CCOs viáveis foram separados em grupos de acordo com sua classificação morfológica (GI, GII ou GIII). Foi utilizada a sonda H2DCFDA para a avaliação do nível de EROs intracelular e as sondas Hoechst 33342 e Iodeto de Propídeo para a avaliação das CCs viáveis e apoptóticas. Na morfometria, foram avaliados o diâmetro total do oócito, o diâmetro do citoplasma, a espessura da zona pelúcida, o raio e o perímetro. Foi utilizada a análise de variância para a análise dos dados. O grupo GI apresentou o maior percentual de oócitos viáveis, as maiores médias dos parâmetros morfométricos e o menor nível de EROS intracelular. Não houve diferença entre os grupos GI e GII em relação ao percentual de CCs viáveis. Em conclusão, torna-se necessário realizar maiores investigações para determinar os níveis de EROs aceitáveis para a seleção de oócitos que serão utilizados para MIV em cadelas.
Palavras-chave: seleção de oócitos; competência meiótica; avaliação oocitária.

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Referências

1. Lemos FG, Azevedo FC, Paula RC, Dalponte JC. Lycalopex vetulus. The IUCN Red List of Threatened Species; 2020 [cited 2024 Aug 24]. Available from: https://dx.doi.org/10.2305/IUCN.UK.2020-2.RLTS.T6926A87695615.en

2. Leite-Pitman MRP, Williams RSR. Atelocynus microtis. The IUCN Red List of Threatened Species; 2011 [cited 2024 Aug 24]. Available from: https://dx.doi.org/10.2305/IUCN.UK.2011-2.RLTS.T6924A12814890.en

3. Paula RC & DeMatteo K. Chrysocyon brachyurus. The IUCN Red List of Threatened Species; 2015 [cited 2024 Aug 24]. Available from: https://dx.doi.org/10.2305/IUCN.UK.2015-4.RLTS.T4819A82316878.en

4. Lucherini M. Lycalopex gymnocercus. The IUCN Red List of Threatened Species; 2016 [cited 2024 Aug 24]. Available from: https://dx.doi.org/10.2305/IUCN.UK.2016-1.RLTS.T6928A85371194.en

5. DeMatteo K, Michalski F, Leite-Pitman MRP. Speothos venaticus. The IUCN Red List of Threatened Species; 2011 [cited 2024 Aug 24]. Available from: https://dx.doi.org/10.2305/IUCN.UK.2011-2.RLTS.T20468A9203243.en

6. Lucherini, M. Cerdocyon thous. The IUCN Red List of Threatened Species; 2015 [cited 2024 Aug 24]. Available from: https://dx.doi.org/10.2305/IUCN.UK.2015-4.RLTS.T4248A81266293.en

7. Songsasen N, Wildt DE. Oocyte biology and challenges in developing in vitro maturation systems in the domestic dog. Anim. Reprod.Sci. 2007;98, 2–22. doi: https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2006.10.004

8. Qin Y, Feng S, Zheng M, Liu X, Zhao J, Zhao Q, Ye J, Mi J, Zhong Y. Progesterone Promotes In Vitro Maturation of Domestic Dog Oocytes Leading to Successful Live Births. Life. 2022;12(11): 1778. https://doi.org/10.3390/life12111778

9. Luvoni GC, Chigioni S, Allievi E, Macis D. Factors involved in vivo and in vitro maturation of canine oocytes. Theriogenology. 2005;63(1), 41-59. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2004.03.004

10. Van Soom A, Vandaele L, Goossens K, de Kruif A, Peelman L. Gamete origin in relation to early embryo development. Theriogenology. 2007;68, S131-S137. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2007.03.019

11. Ruvolo G, Bosco L, Pane A, Morici G, Cittadini E, Roccheri MC. Lower apoptosis rate in human cumulus cells after administration of recombinant luteinizing hormone to women undergoing ovarian stimulation for in vitro fertilization procedures. Fertility and sterility. 2007;87(3), 542-546. https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2006.06.059

12. Hewitt DA, England GC. Effect of preovulatory endocrine events upon maturation of oocytes of domestic bitches. Journal of Reproduction and fertility. Supplement. 1997;51, 83-91. PMID: 9404274.

13. Shi Y, Hu Y, Lv C, Tu G. Effects of Reactive Oxygen Species on Differentiation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells. Ann Transplant. 2016 Nov 14;21:695-700. https://doi.org/10.12659/aot.900463

14. JMP Statistical Discovery LLC. https://www.jmp.com/en/home

15. Sirard MA. Resumption of meiosis: mechanism involved in meiotic progression and its relation with developmental competence. Theriogenology. 2001 Apr 1;55(6):1241-54. https://doi.org/10.1016/s0093-691x(01)00480-0

16. Turathum B, Gao EM, Chian RC. The Function of Cumulus Cells in Oocyte Growth and Maturation and in Subsequent Ovulation and Fertilization. Cells. 2021 Sep 2;10(9):2292. https://doi.org/10.3390/cells10092292

17. Lee S, Kang HG, Jeong PS, Nanjidsuren T, Song BS, Jin YB, Lee SR, Kim SU, Sim BW. Effect of Oocyte Quality Assessed by Brilliant Cresyl Blue (BCB) Staining on Cumulus Cell Expansion and Sonic Hedgehog Signaling in Porcine during In Vitro Maturation. Int J Mol Sci. 2020 Jun 22;21(12):4423. https://doi.org/10.3390/ijms21124423

18. Srsen V, Kalous J, Nagyova E, Sutovský P, King WA, Motlik J. Effects of follicle-stimulating hormone, bovine somatotrophin and okadaic acid on cumulus expansion and nuclear maturation of blue fox (Alopex lagopus) oocytes in vitro. Zygote. 1998 Nov;6(4):299-309. https://doi.org/10.1017/s0967199498000252

19. Schieber M, Chandel NS. ROS function in redox signaling and oxidative stress. Curr Biol. 2014 May 19;24(10):R453-62. https://doi.org/10.1016/j.cub.2014.03.034

20. Broekmans FJ, Soules MR, Fauser BC. Ovarian aging: mechanisms and clinical consequences. Endocr Rev. 2009 Aug;30(5):465-93. https://doi.org/10.1210/er.2009-0006

21. Augoulea A, Mastorakos G, Lambrinoudaki I, Christodoulakos G, Creatsas G. The role of the oxidative-stress in the endometriosis-related infertility. Gynecol Endocrinol. 2009 Feb;25(2):75-81. https://doi.org/10.1080/09513590802485012

22. Costello MF, Shrestha SM, Sjoblom P, McNally G, Bennett MJ, Steigrad SJ, Hughes GJ. Power doppler ultrasound assessment of the relationship between age and ovarian perifollicular blood flow in women undergoing in vitro fertilization treatment. J Assist Reprod Genet. 2006 Sep-Oct;23(9-10):359-65. https://doi.org/10.1007/s10815-006-9067-8

23. Agarwal A, Aponte-Mellado A, Premkumar BJ, Shaman A, Gupta S. The effects of oxidative stress on female reproduction: a review. Reprod Biol Endocrinol. 2012 Jun 29;10:49. https://doi.org/10.1186/1477-7827-10-49

24. Silva AE, Rodriguez P, Cavalcante LF, Rodrigues BA, Rodrigues JL. The influence of oxygen tension on cumulus cell viability of canine COCs matured in high-glucose medium. Reprod Domest Anim. 2009 Jul;44 Suppl 2:259-62. https://doi.org/10.1111/j.1439-0531.2009.01406.x

25. Ikeda S, Imai H, Yamada M. Apoptosis in cumulus cells during in vitro maturation of bovine cumulus-enclosed oocytes. Reproduction. 2003 Mar;125(3):369-76. PMID: 12611600.

26. Esfandiari N, Falcone T, Agarwal A, Attaran M, Nelson DR, Sharma RK. Protein supplementation and the incidence of apoptosis and oxidative stress in mouse embryos. Obstet Gynecol. 2005 Mar;105(3):653-60. https://doi.org/10.1097/01.AOG.0000152384.91385.71

27. Yuan YQ, Van Soom A, Leroy JL, Dewulf J, Van Zeveren A, de Kruif A, Peelman LJ. Apoptosis in cumulus cells, but not in oocytes, may influence bovine embryonic developmental competence. Theriogenology. 2005 May;63(8):2147-63. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2004.09.054

28. Hewitt DA, England GC. The canine oocyte penetration assay; its use as an indicator of dog spermatozoal performance in vitro. Anim Reprod Sci. 1998 Feb 27;50(1-2):123-39. https://doi.org/10.1016/s0378-4320(97)00083-3. PMID: 9615185

29. Otoi T, Fujii M, Tanaka M, Ooka A, Suzuki T. Oocyte diameter in relation to meiotic competence and sperm penetration. Theriogenology. 2000 Sep 1;54(4):535-42. https://doi.org/10.1016/s0093-691x(00)00368-x

30. Otoi T, Ooka A, Murakami M, Karja NW, Suzuki T. Size distribution and meiotic competence of oocytes obtained from bitch ovaries at various stages of the oestrous cycle. Reprod Fertil Dev. 2001;13(2-3):151-5. https://doi.org/10.1071/rd00098

31. Pereira LMC, Bersano PRO, Lopes MD. Influência do Ciclo Estral no Diâmetro Oocitário em Cadelas. RVZ [Internet]. 27º de fevereiro de 2023 [cited 2024 Aug 27];21(3):462-70. Available from: https://rvz.emnuvens.com.br/rvz/article/view/1251

32. Wu YG, Liu Y, Zhou P, Lan GC, Han D, Miao DQ, Tan JH. Selection of oocytes for in vitro maturation by brilliant cresyl blue staining: a study using the mouse model. Cell Res. 2007 Aug;17(8):722-31. https://doi.org/10.1038/cr.2007.66

33. Rodrigues BA, Rodriguez P, Silva AE, Cavalcante LF, Feltrin C, Rodrigues JL. Preliminary study in immature canine oocytes stained with brilliant cresyl blue and obtained from bitches with low and high progesterone serum profiles. Reprod Domest Anim. 2009 Jul;44 Suppl 2:255-8. https://doi.org/10.1111/j.1439-0531.2009.01408.x

34. Rodrigues BA, Rodrigues JL. In vitro maturation of canine oocytes: a unique conundrum. Animal Reproduction (AR)[Internet]. 2010 [cited 2024 Aug 27];7(1), 3-15. Available from: https://animal-reproduction.org/article/5b5a6063f7783717068b472b/pdf/animreprod-7-1-3.pdf

Publicado

2026-03-26

Como Citar

RODRIGUES, Ana Luiza Sousa; ARCCE, Irving Mitchell Laines; NEGREIROS, Natanael Aguiar Braga; FREITAS, Vicente José Figueirêdo; TEIXEIRA, Dárcio Ítalo Alves. Marcadores bioquímicos e morfológicos da qualidade oocitária em cadelas: papel das células do cumulus e espécies reativas de oxigênio. Ciência Animal Brasileira / Brazilian Animal Science, Goiânia, v. 27, 2026. Disponível em: https://revistas.ufg.br/vet/article/view/80766. Acesso em: 29 mar. 2026.

Edição

Seção

MEDICINA VETERINÁRIA

Declaração de dados

  • Os dados de pesquisa estão disponíveis sob demanda, condição justificada no manuscrito