Comparação de métodos para extração de dna na reação em cadeia da polimerase para detecção de Salmonella enterica sorovar Enteritidis em produtos avícolas

Resumo

A identificação de Salmonella spp. em amostras de alimentos por diagnóstico microbiológico é demorada, com aproximadamente cinco diferentes etapas, levando cerca de 120 horas até o resultado final. A utilização da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) pode diminuir esse período; entretanto, substâncias presentes nas amostras podem afetar a reação. O objetivo deste trabalho foi comparar a extração de DNA de Salmonella enterica sorovar Enteritidis (SE), por tratamento térmico e pelo uso do cetyltrimethil ammonium bromide (CTAB), em produtos provenientes de granjas avícolas, correspondentes a matéria prima (farinha de carne) e a suabes de arrasto experimentalmente contaminados. As amostras de DNA obtidas com as extrações foram submetidas a PCR, utilizando-se um par de oligonucleotídeos iniciadores para amplificação de DNA do gene específico de SE – Sdf 1. Comparando-se os métodos de extração, observou-se que quando do uso do CTAB detectou-se SE em 70% de matéria prima e em 80% de suabes de arrasto, enquanto com o método por tratamento térmico houve positividade em 20% de matéria prima e em 40% de suabes de arrasto. Houve detecção de SE em ambos os métodos utilizados para extração de DNA, porém, o uso de CTAB detectou maior número de amostras positivas, quando comparado com o tratamento térmico.

PALAVRAS-CHAVES: PCR, Salmonella Enteritidis, ave, extração de DNA, CTAB.