Separação de espermatozoides portadores do cromossomo X bovino por centrifugação em gradiente de densidade contínuo de percoll e optiprep: efeito sobre a viabilidade espermática e na produção in vitro de embriões

Resumo

O objetivo deste estudo foi separar espermatozoides bovinos portadores do cromossomo X pela centrifugação em gradiente de densidade contínuo de Percoll e OptiPrep, e validar a sexagem pela reação em cadeia da polimerase (PCR), dos embriões produzidos in vitro. Para a sexagem, espermatozoides descongelados foram depositados nos gradientes de densidade, previamente preparados, em tubos de poliestireno, 24 horas antes da sexagem e mantidos a 4°C. Centrifugou-se a 500 x g por quinze minutos a 22°C. Os sobrenadantes foram aspirados, e os espermatozoides recuperados do fundo dos tubos. Avaliaram-se a viabilidade e a integridade dos espermatozoides pela coloração Azul de Tripan/Giemsa e determinou-se a taxa de clivagem e de blastocisto pela produção in vitro dos embriões, identificando-se o sexo genético deste embriões pela PCR. Não foram detectados danos à viabilidade e à integridade acrossomal, nem nas taxas de clivagem e de blastocistos no grupo Percoll e OptiPrep em comparação com o grupo não centrifugado (P>0,05). A porcentagem de embriões fêmeas no grupo Percoll e OptiPrep foi de 63% e 47,6%, respectivamente, e no grupo controle foi de 48,7%. Houve um desvio na proporção sexual no gradiente de Percoll, sem redução da viabilidade espermática e das taxas de produção in vitro.

PALAVRAS-CHAVES: Bovino, centrifugação, espermatozoides X, produção in vitro de embriões, PCR.