Resumo

Objetivou-se avaliar os efeitos da administração de análogo da gonadorelina no momento da transferência de embrião em tempo fixo (TETF), da categoria da receptora e da estação do ano na prenhez por TETF aos 30 (P/TETF 30) e 60 (P/ TETF60) após o estro e nas perdas gestacionais (PG). As receptoras foram distribuídas aleatoriamente: grupo tratado (n = 624), onde as receptoras receberam injeção intramuscular de 0,2 mg de gonadorelina (Fertagyl®) na TETF e grupo controle (n =687) permaneceu sem tratamento. As receptoras foram previamente tratadas com protocolo de sincronização à base de progesterona e estradiol. Todos os embriões foram produzidos in vitro. Os dados foram analisados por regressão logística multivariada, utilizando o procedimento GLIMIX do SAS. Foi detectada maior P/TETF30 (45,8 vs. 40,0%; P =0,03) e P/TETF60 (43,0 vs. 37,0%; P =0,01) no grupo tratado. Houve tendência de redução da PG no grupo tratado (4,0 vs. 7,0%; P =0,09). Vacas secas (2,70%) e vacas em lactação (2,47%) apresentaram menor PG (P =0,001), em comparação com novilhas (10,42%). Na estação primavera/verão a P/TETF60 foi menor (P = 0,024). Maior PG tendeu a ocorrer na estação mais quente. O tratamento com gonadorelina no momento do TETF aumentou a prenhez por TE aos dias 30 e 60 e reduziu o PG. Vacas receptoras secas e lactantes apresentaram menor taxa de PG em comparação com novilhas. Além disso, a TE realizada nas estações mais quentes do ano resultou em menor taxa de prenhez aos 60 dias e maior PG.

Palavras-chave:
eficiência reprodutiva; gado de leite; reprodução

Abstract

The objectives were to evaluate the effects of recipient category, season and administration of a gonadorelin analogue at the time of fixed-time embryo transfer (FTET) on pregnancy per FTET at 30 and 60 days after oestrus and on pregnancy losses (PL). Recipients were randomly assigned to: treated group (n = 624), in which recipients received an intramuscular injection of 0.2 mg of gonadorelin (Fertagyl®) at FTET; or a control group (n = 687) that remained untreated. Recipients were previously treated with a synchronisation protocol based on progesterone and oestradiol. All embryos were produced in vitro. The data with binomial distribution were analysed by multivariate logistic regression, using the GLIMIX procedure of SAS. Higher P/FTET was observed at 30 days (45.8 vs. 40.0%; P = 0.03) and 60 days (43.0 vs. 37.0%; P = 0.01) in the treated group. There was a tendency toward reduced PL in the treated group (4.0 vs. 7.0%; P = 0.09). Dry cows (2.70%) and lactating cows (2.47%) had less PL (P = 0.001) compared with heifers (10.42%). In the spring/summer season the P/ FTET at 60 days was smaller (P =0.024). Greater PL tended to occur in the warmer season. Treatment with gonadorelin at the time of bovine ET increased the pregnancy per ET at days 30 and 60 and reduced PL. Additionally, dry and lactating recipient cows showed a lower PL rate compared to heifers. Furthermore, ET performed in the warmer seasons of the year resulted in a lower pregnancy rate at day 60 and greater PL.

Keywords:
reproductive efficiency; dairy cattle; reproduction

1. Introdução

A transferência de embriões (TE) é uma importante biotécnica para a produção animal, sendo uma ferramenta para a multiplicação de animais de mérito genético superior(¹1 Batista EOS, Guerreiro BM, Freitas BG, Silva JCB, Vieira LM, Ferreira RM, Rezende RG, Basso AC, Lopes RNVR, Rennó FP. Plasma anti-Müllerian hormone as a predictive endocrine marker to select Bos taurus (Holstein) and Bos indicus (Nelore) calves for in vitro embryo production. Domestic Animal Endocrinology. 2016; 54, 1–9. https://doi. org/10.1016/j.domaniend.2015.08.001
https://doi. org/10.1016/j.domaniend.201... ). Segundo Viana(²2 Viana JHM. 2020 Statistics of embryo production and transfer in domestic farm animals. Embryo Technology Newsletter. 2022; 39, 24–38), em 2020 foram produzidos mais de 1,1 milhão de embriões in vitro em todo o mundo. Isto mostra o grande potencial e a importância desta biotécnica na reprodução bovina(²2 Viana JHM. 2020 Statistics of embryo production and transfer in domestic farm animals. Embryo Technology Newsletter. 2022; 39, 24–38). Apesar do crescimento do uso de TE em bovinos, seus resultados permanecem inconsistentes. Receptoras de embriões produzidos in vitro (PIVE) apresentam menores taxas de concepção e maior perda gestacional em comparação com as vacas que recebem embriões produzidos in vivo e inseminação artificial(³3 Sartori R, Prata AB, Figueiredo ACS, Sanches BV, Pontes GCS, Viana JHM. Update and overview on assisted reproductive technologies (arts) in Brazil. Anim. Reprod. 2016; 13, 300–312. http://dx.doi.org/10.21451/1984-3143-AR873
http://dx.doi.org/10.21451/1984-3143-AR8... ). Portanto, estudos que busquem criar novas estratégias para aumentar a eficiência dos programas de produção de embriões in vitro e TE devem ser desenvolvidos.

Dentre vários fatores que podem influenciar o sucesso da TE, a qualidade do corpo lúteo (CL) desempenha papel importante na manutenção da prenhez(⁴4 Diskin MG, Morris DG. Embryonic and early foetal losses in cattle and other ruminants. Reproduction in Domestic Animals. 2008; 43, 260–267. https://doi.org/10.1111/j.1439-0531.2008.01171.x
https://doi.org/10.1111/j.1439-0531.2008... ). A qualidade do CL está correlacionada com a concentração sérica de progesterona (P4), responsável pela concepção e desenvolvimento embrionário intrauterino(⁵5 Wiltbank MC, Souza AH, Carvahlo PA, Cunha AP, Giordano JO, Fricke PM. Physiological and practical effects of progesterone on reproduction in dairy cattle. Animal. 2014; 8(1), 70–81. https://doi.org/10.1017/ S1751731114000585
https://doi.org/10.1017/ S17517311140005... ). O aumento da concentração sérica de P4 imediatamente após a inseminação tem função na manutenção da prenhez e na promoção do desenvolvimento adequado do concepto(⁶6 Inskeep EK. Preovulatory, postovulatory, and post maternal recognition effects of concentrations of progesterone on embryonic survival in the cow. Journal of Animal Science. 2004; 82, 24–39. https://doi.org/10.2527/2004.8213_ supplE24x
https://doi.org/10.2527/2004.8213_ suppl... ,⁷7 Stronge AJH, Sreenan JM, Diskin MG, Mee JF, Kenny DA, Morris DG. Post-insemination milk progesterone concentration and embryo survival in dairy cows. Theriogenology. 2005; 64, 1212–1224. https://doi.org/10.1016/j. theriogenology.2005.02.007
https://doi.org/10.1016/j. theriogenolog... ,⁸8 Mcneil RE, Diskin MG, Sreenan JM, Morris DG. Associations between milk progesterone on different days and with embryo survival during the early luteal phase in dairy cows. Theriogenology. 2006; 65, 1435–1441. https://doi. org/10.1016/j.theriogenology.2005.08.015
https://doi. org/10.1016/j.theriogenolog... ). Indiretamente, a presença de P4 no ambiente uterino modifica a expressão gênica endometrial(⁹9 Lonergan P, Forde N. Maternal-embryo interaction leading up to the initiation of implantation of pregnancy in cattle. Animal. 2014; 8, 64–69. https://doi.org/10.1017/S1751731114000470
https://doi.org/10.1017/S175173111400047... ), que por sua vez possibilita o desenvolvimento do embrião e a produção de interferon tau. O efeito direto da P4 no alongamento do embrião não foi totalmente elucidado. Porém, a presença de P4 em níveis adequados, antes mesmo da deposição do embrião por meio da inovulação, prepara o ambiente uterino, tornando-o mais receptivo ao embrião e favorecendo o seu desenvolvimento(¹⁰10 Geisert RD, Short EC, Zavy MC. Maternal recognition of pregnancy.1991; 282, 87–298.).

O tratamento pós-ovulatório com hormônios luteotrópicos na primeira semana do ciclo estral, como a gonadotrofina coriônica humana (hCG) e o hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH), pode melhorar as taxas de prenhez e reduzir as perdas gestacionais(¹¹11 Marques MO, Nasser LF, Silva RCP, Bó GA, Sales JNS, Sá Filho MF, Reis EL, Binelli M, Baruselli PS. Follicular dynamics and pregnancy rates in Bos taurus x Bos indicus embryo transfer recipients treated to increase plasma progesterone concentrations. Anim. Reprod. 2012; 9, 111–119.,¹²12 Vasconcelos JLM, Sá Filho OG, Justolin PLT, Morelli P, Aragon FL, Veras MB, Soriano S. Effects of post breeding gonadotropin treatments on conception rates of lactating dairy cows subjected to timed artificial insemination or embryo transfer in a tropical environment. Journal of Dairy Science. 2011; 94, 223–234. https://doi.org/10.3168/ jds.2010-3462
https://doi.org/10.3168/ jds.2010-3462... ). Esses hormônios promovem a formação de um CL acessório e, consequentemente, aumento na concentração sérica de P4. Outra explicação para o aumento da taxa de prenhez foi descrita em vacas tratadas com hormônios luteotrópicos, a maior concentração de P4, causada pela formação de um CL acessório, leva a uma melhor modulação do crescimento folicular. Assim, os folículos que crescem nestas condições são geralmente menores e, portanto, produzem menos estrogeno. Neste momento, concentrações elevadas de estrogeno não são desejáveis, pois podem aumentar a possibilidade de luteólise, o que interromperia a gestação(¹¹11 Marques MO, Nasser LF, Silva RCP, Bó GA, Sales JNS, Sá Filho MF, Reis EL, Binelli M, Baruselli PS. Follicular dynamics and pregnancy rates in Bos taurus x Bos indicus embryo transfer recipients treated to increase plasma progesterone concentrations. Anim. Reprod. 2012; 9, 111–119.). Devido aos resultados inconsistentes da transferência de embriões em tempo fixo (TETF) e à eficácia controversa dos hormônios luteotrópicos no aumento da taxa de prenhez (¹³13 Loiola MVG, Pereira DFC, Vasconcelos LV, Lima MCC, Ferraz PA, Rodrigues A, Bittencourt RF, Jesus EO, Ribeiro Filho AL. Taxa de gestação de receptoras de embriões bovinos tratadas com um análogo do GnRH no momento da inovulação. Rev. Bras. Saúde Prod. Anim. 2014; 15, 782–789.), mais pesquisas nesta área são necessárias.

Os objetivos com este estudo foram avaliar os efeitos da administração de um análogo da gonadorelina (Fertagyl®) no momento do TETF, da categoria da receptora, e da estação do ano na prenhez por TETF aos 30 (P/TETF 30) e 60 (P/ TETF60) dias após o estro e nas perdas gestacionais (PG).

2. Material e Métodos

O estudo foi realizado em 11 fazendas comerciais de Uberlândia, Minas Gerais, Sudeste do Brasil, no período de julho de 2015 a julho de 2016. O clima, segundo a classificação de Köppen, é do tipo Aw, megatérmico, com verões quentes e chuvosos (outubro a março) e invernos frios e secos (abril a setembro)(¹⁴14 Rosa R. Abordagem preliminar das condições climáticas de Uberlândia-MG. Sociedade & Natureza. 1991; 3, 91–108.). Nas estações primavera/verão, a temperatura média foi de 24,97 °C e a umidade relativa do ar foi de 69,05% e, nas estações outono/inverno, a temperatura média foi de 22,29 °C e a umidade relativa do ar foi de 49,34%(¹⁴14 Rosa R. Abordagem preliminar das condições climáticas de Uberlândia-MG. Sociedade & Natureza. 1991; 3, 91–108.). Este trabalho foi conduzido de acordo com os Princípios Éticos em Experimentação Animal, aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais (CEUA) da Universidade Federal de Uberlândia (UFU) sob protocolo número 041/14.

2.1 Doadoras e embriões

Foram utilizadas 144 doadoras de ovócitos e sêmen de 38 touros diferentes. As doadoras não foram submetidas a nenhum protocolo hormonal e seus ovócitos foram coletados por aspiração folicular guiada por ultrassom (OPU). O intervalo entre OPU em cada doadora foi de pelo menos dois meses. Todos os embriões foram produzidos in vitro. Os embriões foram classificados pelos técnicos de laboratório de acordo com seu estágio de desenvolvimento (de 1 a 9) e sua qualidade morfológica (de 1 a 4)(²2 Viana JHM. 2020 Statistics of embryo production and transfer in domestic farm animals. Embryo Technology Newsletter. 2022; 39, 24–38). Foram utilizados apenas embriões classificados como grau 1 para qualidade morfológica e nos estágios de desenvolvimento três (mórula), quatro (mórula compacta), cinco (blastocisto inicial), seis (blastocisto), sete (blastocisto expandido) ou oito (blastocisto eclodido)(¹⁶16 Bó GA, Mapletoft, RJ. Evaluation and classification of bovine embryos. Anim. Reprod. 2013; 10, 168–173.). Foram utilizados embriões das raças Nelore (80), Gir (530) e Girolando (701). Os embriões foram transferidos a fresco de acordo com a ordem em que foram alocados no transportador de embriões.

2.2 Receptoras e tratamento

Para serem elegíveis para o programa TETF, as receptoras mestiças não poderiam apresentar nenhuma doença clínica. Além disso, o escore de condição corporal (ECC) deveria estar entre 3 e 3,75, em uma escala de 1 a 5(¹⁷17 Klopčič M, Hamoen A, Bewley J. Body condition scoring of dairy cows. University of Ljubljana Biotechnical Faculty. Slovenia. 2011; 1–44.). As receptoras selecionadas foram divididas aleatoriamente em dois grupos: o grupo tratado (n = 624, tratado com 0,2 mg de gonadorelina (Fertagyl®) no dia do TETF e o grupo controle (n = 687, não tratado).

O protocolo hormonal utilizado para sincronizar a ovulação das receptoras foi: D0: inserção do dispositivo intravaginal P4 (FertilCare®) com dosagem de 1,2 g e aplicação intramuscular de 2,0 mg de benzoato de estradiol (FertilCare Sincronização®); D7: administração de 0,526mg de cloprostenol sódico (Sincrosin®) por via intramuscular; D9: administração de 0,526mg de cloprostenol sódico (Sincrosin®) por via intramuscular + 1mg de cipionato de estradiol (FertilCare Ovulação®) por via intramuscular + retirada do dispositivo intravaginal; D18: as receptoras foram submetidos a exame ultrassonográfico transretal e apenas aquelas que apresentavam pelo menos uma CL foram consideradas elegíveis para o programa TETF. Os embriões foram transferidos para o corno uterino ipsilateral do ovário que possuía o CL, sendo administrada ou não 0,2 mg de gonadorelina i.m. (Fertagyl®). Os embriões foram designados as recptoras de forma aleatória. As avaliações de saúde, ECC e ovários foram realizadas pelo mesmo veterinário, assim como todas as inovulações e diagnósticos de gestação.

2.3 Diagnósticos de prenhez e coleta de dados

O diagnóstico de prenhez foi realizado por exame ultrassonográfico transretal, 23 ± 5 dias após o TETF. Cerca de 30 ± 5 dias depois, os animais diagnosticados como gestantes foram reexaminados. A prenhez por TETF aos 30 dias de gestação (P/TETF 30) foi calculada pela razão entre o número de animais gestantes na primeira avaliação e o número total de TETF. A prenhez por TETF aos 60 dias de gestação (P/TETF 60) foi calculada pela razão entre o número de animais gestantes na segunda avaliação e o número total de TETF. A perda de gestação (PG) foi calculada pela razão entre o número de perdas de gestação entre o primeiro e o segundo diagnóstico e o número de animais gestantes no primeiro diagnóstico. O resultado dessas divisões foi multiplicado por 100 para obter o valor percentual. Também foram coletados dados sobre a estação do ano em que a TETF foi realizada (primavera/verão e outono/inverno) e a categoria receptora (novilhas, vacas lactantes e vacas secas).

2.4 Análise estatística

Os dados com distribuição binomial (P/TETF30, P/TETF60 e PG) foram analisados por regressão logística multivariada, utilizando o procedimento GLIMIX do SAS, versão 9.2 (SAS/ STAT, SAS Institute Inc., Cary, NC). No primeiro modelo foram avaliados os efeitos do tratamento, estação do ano da TETF, categoria da receptora, bem como possíveis efeitos de interação sobre P/TETF 30, P/TETF60 e PG. Uma vez que nenhum efeito das possíveis interações foi detectado, elas foram retiradas do modelo final. Considerou-se significância estatística quando P ≤ 0,05 e tendência estatística quando 0,05 < P ≤ 0,10.

3. Resultados

O tratamento afetou tanto P/TETF30 (P = 0,03) quanto P/TETF60 (P = 0,01). O tratamento com gonadorelina no dia 7 tendeu (P = 0,09) a reduzir a PG (7% e 4% para os grupos controle e tratado, respectivamente, Tabela 1).

Não houve efeito da categoria receptora sobre P/TETF30 e P/TETF60, porém, as novilhas tiveram maior PG (P = 0,001), quando comparadas com vacas secas e vacas em lactação (Tabela 2). A estação do TETF afetou a gestação por TETF aos 60 dias (P = 0,024) e tendeu a afetar (P = 0,095) a PG. Durante a estação primavera/verão, a PG tendeu a ser maior em relação ao outono/inverno. Consequentemente, a P/TETF60 foi maior nas estações outono/ inverno (Tabela 3).

4. Discussão

Um dos objetivos deste estudo foi avaliar se o tratamento com gonadorelina no momento do TE melhoraria ou não a prenhez por TETF aos 30 e 60 dias. Os resultados deste estudo mostraram que os grupos tratados com gonadorelina no momento do TETF tiveram resultados aumentados na prenhez quando comparados ao grupo controle (5,8% aos 30 dias e 6% aos 60 dias; Tabela 1). Resultados semelhantes foram encontrados por Marques et al. (¹¹11 Marques MO, Nasser LF, Silva RCP, Bó GA, Sales JNS, Sá Filho MF, Reis EL, Binelli M, Baruselli PS. Follicular dynamics and pregnancy rates in Bos taurus x Bos indicus embryo transfer recipients treated to increase plasma progesterone concentrations. Anim. Reprod. 2012; 9, 111–119.), em que animais tratados com GnRH apresentaram maior P/TE em comparação ao grupo controle. Vasconcelos et al.(¹²12 Vasconcelos JLM, Sá Filho OG, Justolin PLT, Morelli P, Aragon FL, Veras MB, Soriano S. Effects of post breeding gonadotropin treatments on conception rates of lactating dairy cows subjected to timed artificial insemination or embryo transfer in a tropical environment. Journal of Dairy Science. 2011; 94, 223–234. https://doi.org/10.3168/ jds.2010-3462
https://doi.org/10.3168/ jds.2010-3462... ) também encontraram maior P/TE em receptoras tratadas com hCG e GnRH, em comparação ao grupo controle. Juntos, estes estudos mostram que a administração de um indutor de ovulação pode ser eficaz para melhorar os resultados da prenhez em programas de TE.

Segundo Guerra et al. (¹⁸18 Guerra AG, Sala RV, Sala LC, Baez GM, Motta JCL, Fosado M, Moreno JF, Wiltbank MC. Postovulatory treatment with GnRH on day 5 reduces pregnancy loss in recipients receiving an in vitro produced expanded blastocyst. Theriogenology. 2020; 14, 202–210. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2019.05.010
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology... ), o tratamento com gonadorelina, ao fazer com que o folículo dominante da primeira onda folicular ovule e forme um CL acessório, pode melhorar a P/ TE da receptora. Esse tratamento provoca aumento na concentração de P4(¹⁹19 Cabrera EM, Lauber MR, Peralta EM, Bilby TR, Fricke PM. Human chorionic gonadotropin dose response for induction of ovulation 7 days after a synchronized ovulation in lactating Holstein cows. Journal of Dairy Science communications. 2021; 2(1), 35-40. https://doi.org/10.3168/jdsc.2020-0024
https://doi.org/10.3168/jdsc.2020-0024... ), o que é de fundamental importância para o desenvolvimento do concepto e manutenção da prenhez. Além disso, a alta concentração de P4 proporciona um ambiente uterino mais favorável ao alongamento do concepto, o que influencia positivamente a produção de interferon tau e o reconhecimento materno da gestação(²⁰20 Maillo V, Rizos D, Besenfelder U, Havlicek V, Kelly AK, Garrett M, Lonergan P. Influence of lactation on metabolic characteristics and embryo development in postpartum Holstein dairy cows. Journal of Dairy Science. 2012; 95, 3865–3876. https://doi.org/10.3168/jds.2011-5270
https://doi.org/10.3168/jds.2011-5270... ).

Uma segunda possível explicação para os resultados encontrados é que a ovulação do folículo dominante na primeira onda folicular levando à formação de um CL acessório e o consequente aumento na concentração de P4 inibem a presença de um novo folículo dominante no momento do reconhecimento materno da gestação, reduzindo a possibilidade de elevação do estradiol circulante e o desenvolvimento do gatilho luteolítico neste período crítico da gestação(¹¹11 Marques MO, Nasser LF, Silva RCP, Bó GA, Sales JNS, Sá Filho MF, Reis EL, Binelli M, Baruselli PS. Follicular dynamics and pregnancy rates in Bos taurus x Bos indicus embryo transfer recipients treated to increase plasma progesterone concentrations. Anim. Reprod. 2012; 9, 111–119.). Um estudo que caracterizou o desenvolvimento folicular e luteal e a luteólise em vacas Holandesas lactantes não inseminadas que formaram CL acessório em resposta ao tratamento com hCG após a ovulação, mostrou que a formação de CL acessório alterou a luteólise natural e a ovulação subsequente ao tratamento, que são eventos fisiológicos críticos na regulação da duração do ciclo estral, mas um possível atraso na luteólise poderia ser benéfico para os resultados de prenhez após a TE(²¹21 Cunha TO, Statz, LR, Domingues RR, Andrade JPN, Wiltbank MC, Martins JPN. Accessory corpus luteum induced by human chorionic gonadotropin on day 7 or days 7 and 13 of the estrous cycle affected follicular and luteal dynamics and luteolysis in lactating Holstein cows. Journal of Dairy Science.2022; 105(3), 2631-2650. https://doi. org/10.3168/jds.2021-20619
https://doi. org/10.3168/jds.2021-20619... ).

Em contrapartida, alguns estudos demonstraram que o uso de medicamentos que promovem a formação de um CL acessório não melhora a prenhez nas receptoras(¹³13 Loiola MVG, Pereira DFC, Vasconcelos LV, Lima MCC, Ferraz PA, Rodrigues A, Bittencourt RF, Jesus EO, Ribeiro Filho AL. Taxa de gestação de receptoras de embriões bovinos tratadas com um análogo do GnRH no momento da inovulação. Rev. Bras. Saúde Prod. Anim. 2014; 15, 782–789.). Guerra et al. (¹⁸18 Guerra AG, Sala RV, Sala LC, Baez GM, Motta JCL, Fosado M, Moreno JF, Wiltbank MC. Postovulatory treatment with GnRH on day 5 reduces pregnancy loss in recipients receiving an in vitro produced expanded blastocyst. Theriogenology. 2020; 14, 202–210. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2019.05.010
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology... ) não encontraram melhora na taxa de concepção de animais tratados com GnRH. Segundo os autores, isso pode ter ocorrido porque ambos os grupos, tratado e controle, apresentaram alta fertilidade e baixa PG. Portanto, o tratamento com GnRH de 5 a 7 dias após a ovulação pode não ser eficiente em rebanhos com bons resultados de fertilidade.

Loiola et al. (¹³13 Loiola MVG, Pereira DFC, Vasconcelos LV, Lima MCC, Ferraz PA, Rodrigues A, Bittencourt RF, Jesus EO, Ribeiro Filho AL. Taxa de gestação de receptoras de embriões bovinos tratadas com um análogo do GnRH no momento da inovulação. Rev. Bras. Saúde Prod. Anim. 2014; 15, 782–789.) relataram menor taxa de prenhez para um grupo tratado com GnRH. No entanto, o protocolo utilizado incluía a administração de gonadotrofina coriônica equina (eCG). Segundo Baruselli et al. (²²22 Baruselli PS, Reis EL, Carvalho NAT, Carvalho JBP. eCG increase ovulation rate and plasmatic progesterone concentration in Nelore (Bos indicus) heifers treated with progesterone releasing device. Anais. Belo Horizonte, MG. 2004.), o protocolo utilizado para sincronização das receptoras pode influenciar a P/TE. Protocolos que utilizam eCG geralmente levam a um maior desenvolvimento do folículo dominante e, consequentemente, à formação de um CL maior. Um CL maior tem maior capacidade de produção de P4, levando a uma prenhez maior. O uso de eCG também pode aumentar a taxa de ovulação dupla quando administrado durante a fase inicial da onda folicular, aumentando as concentrações de P4 após a ovulação. Como o uso de eCG já aumenta as concentrações de P4, o tratamento com GnRH após a ovulação pode não influenciar as taxas de P/TE neste caso. Isso pode explicar os resultados encontrados por Loiola et al. (¹³13 Loiola MVG, Pereira DFC, Vasconcelos LV, Lima MCC, Ferraz PA, Rodrigues A, Bittencourt RF, Jesus EO, Ribeiro Filho AL. Taxa de gestação de receptoras de embriões bovinos tratadas com um análogo do GnRH no momento da inovulação. Rev. Bras. Saúde Prod. Anim. 2014; 15, 782–789.), que divergem dos resultados do presente estudo.

O tratamento com gonadorelina tendeu a reduzir a taxa de PG (P= 0,095; Tabela 1). Alguns estudos que administraram diferentes drogas luteotrópicas encontraram resultados semelhantes ao presente estudo(²³23 Niles AM Fricke HP, Carvalho PD, Wiltbank MC, Hernandez LL, Fricke PM. Effect of treatment with human chorionic gonadotropin 7 days after artificial insemination or at the time of embryo transfer on reproductive outcomes in nulliparous Holstein heifers. Journal of Dairy Science. 2019; (102), 2593–2606. https://doi.org/10.3168/ jds.2018-15588
https://doi.org/10.3168/ jds.2018-15588... ). Niles et al. (²³23 Niles AM Fricke HP, Carvalho PD, Wiltbank MC, Hernandez LL, Fricke PM. Effect of treatment with human chorionic gonadotropin 7 days after artificial insemination or at the time of embryo transfer on reproductive outcomes in nulliparous Holstein heifers. Journal of Dairy Science. 2019; (102), 2593–2606. https://doi.org/10.3168/ jds.2018-15588
https://doi.org/10.3168/ jds.2018-15588... ), observaram redução da PG entre o primeiro e o segundo diagnóstico de gestação (dias 32 a 67) em novilhas tratadas com hCG no dia da TETF (7 dias após a ovulação). Guerra et al. (¹⁸18 Guerra AG, Sala RV, Sala LC, Baez GM, Motta JCL, Fosado M, Moreno JF, Wiltbank MC. Postovulatory treatment with GnRH on day 5 reduces pregnancy loss in recipients receiving an in vitro produced expanded blastocyst. Theriogenology. 2020; 14, 202–210. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2019.05.010
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology... ), estudando a administração de GnRH no 5º dia do ciclo estral de novilhas Holandesas e mestiças, relataram efeito da qualidade embrionária na taxa de PG. Os animais que receberam embriões no estágio 7 de desenvolvimento (blastocisto expandido) tiveram menor percentual de perdas gestacionais do que as demais receptoras. Além disso, o efeito da presença de um CL acessório nesses animais potencializou a redução da PG. Essa redução da PG chegou até a 50%. Segundo os autores, o estágio embrionário e a presença de CL acessório (responsável por maiores concentrações de P4) são fatores que possivelmente contribuíram para a diminuição da PG.

Não foi detectado efeito da categoria da receptora (novilhas, vacas secas e vacas lactantes) na prenhez por TE aos 30 dias e 60 dias, porém as novilhas apresentaram maior PG quando comparadas aos demais grupos (P = 0,001; Tabela 2). Esses resultados foram contrários ao esperado, uma vez que a maioria dos dados da literatura mostra que novilhas tendem a ter melhores resultados gestacionais e menos perdas gestacionais(²⁴24 Hasler JF. Forty years of embryo transfer in cattle: A review focusing on the journal Theriogenology, the growth of the industry in North America, and personal reminisces. Theriogenology. 2014; 81, 152–169. https://doi. org/10.1016/j.theriogenology.2013.09.010
https://doi. org/10.1016/j.theriogenolog... ). Contudo, a taxa de PG para novilhas deste estudo foi semelhantes aos valores encontrados em outros estudos(²⁵25 Scanavez AL, Campos CC, Santos RM. Taxa de prenhez e de perda de gestação em receptoras de embriões bovinos produzidos in vitro. Arq. Bras. Med. Vet. Zootec. 2013; 65, 722–728. https://doi.org/10.1590/S0102-09352013000300017
https://doi.org/10.1590/S0102-0935201300... ). Assim, essa diferença pode ser devida a baixa taxa de PG encontrado para as outras duas categorias de receptoras (vacas secas e lactantes). Normalmente, são observadas taxas reduzidas de P/TE e altas de PG para vacas em lactação de alta produção(²⁶26 Vasconcelos JLM, Demétrio DGB, Santos RM, Chiari JR, Rodrigues CA, Filho OGS. Factors potentially affecting fertility of lactating dairy cow recipients. Theriogenology. 2006; 65, 192–200. https://doi.org/10.1016/j. theriogenology.2005.09.030
https://doi.org/10.1016/j. theriogenolog... ). Como as vacas receptoras utilizadas no presente estudo eram vacas de baixa produção ou secas, o efeito negativo da produção de leite pode não ter impactado as taxas de PG, explicando assim os baixos valores encontrados.

Em estudo que utilizou hCG, como indutor de ovulação, foi observada maior concentração de P4 no 12º dia após a IA, e independente da paridade, a prenhez melhorou apenas nas vacas primíparas, em comparação à vaca multípara(²⁷27 Zolini AM, Ortiz WG, Estrada-Cortes E, Ortega MS, Dikmen SERDAL, Sosa F, Giordano JO, Hansen PJ. Interactions of human chorionic gonadotropin with genotype and parity on fertility responses of lactating dairy cows. Journal of Dairy Science. 2019;102(1), 846-856. https://doi.org/10.3168/jds.2018-15358
https://doi.org/10.3168/jds.2018-15358... ). Em contraste com os presentes resultados, Silva et al. (2023) (²⁸28 Silva LO, Motta JC, Oliva AL, Madureira G, Alves RL, Folchini NP, Silva MA, Silva TJB, Consentini CEC, Wiltbank MC, Sartori R. Influence of GnRH analog and dose on LH release and ovulatory response in Bos indicus heifers and cows on day seven of the estrous cycle. Theriogenology. 2023. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2023.10.015
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology... ) em estudos com Bos indicus observaram que a administração de dose única de GnRH foi capaz de induzir a ovulação em novilhas, mas não em vacas. Segundo os autores, uma possível razão para este achado é que a ovulação em novilhas pode exigir um pico de LH mais baixo em comparação com vacas, levando a um possível efeito de paridade a nível folicular, impactando a resposta ovulatória.

Foi encontrado efeito da estação do ano (P = 0,024) na P/TETF60. As receptoras que foram submetidos à TETF no outono/inverno apresentaram melhor desempenho reprodutivo em comparação aos animais onde a TETF foi realizada na primavera/verão (Tabela 3). Demétrio et al. (²⁹29 Demétrio DG, Santos RM, Demetrio CG, Vasconcelos JL. Factors affecting conception rates following artificial insemination or embryo transfer in lactating Holstein cows. Journal of Dairy Science. 2007; 90, 5073–5082. https:// doi.org/10.3168/jds.2007-0223
https:// doi.org/10.3168/jds.2007-0223... ) relataram que o aumento da temperatura corporal dos animais no sétimo dia após a ovulação tem efeito negativo na gestação aos 28 dias em animais submetidos a TE. Da mesma forma, Ferraz et al. (³⁰30 Ferraz PA, Burnley C, Karanja J, Vieira-Neto A, Santos JEP, Chebel RC, Galvão KN. Factors affecting the success of a large embryo transfer program in Holstein cattle in a commercial herd in the southeast region of the United States. Theriogenology. 2016; 86, 1834–1841. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2016.05.032
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology... ), avaliaram a relação entre o índice de temperatura e umidade (ITU) com a taxa de concepção, observando que a taxa de concepção para vacas e novilhas diminuiu com o aumento do ITU. Eles também demonstraram que as vacas são mais sensíveis ao estresse térmico indicado pelo ITU em comparação com as novilhas. Segundo Sartori et al. (³¹31 Sartori R, Sartor-Bergfelt R, Mertens SA, Guenther JN, Parrish JJ, Wiltbank MC. Fertilization and early embryonic development in heifers and lactating cows in summer and lactating and dry cows in winter. Journal of Dairy Science. 2002; 85, 2803–2812. https://doi.org/10.3168/jds.S0022-0302(02)74367-1
https://doi.org/10.3168/jds.S0022-0302(0... ), quando comparadas às novilhas, é mais difícil para as vacas regularem a temperatura corporal em resposta ao clima quente. Esta maior susceptibilidade ao estresse térmico contribui para taxas de concepção mais baixas durante as estações quentes.

No presente estudo, a estação do ano em que foi realizado a TETF tendeu a afetar a PG (P = 0,095). Nas estações mais quentes (primavera/verão) a PG foi maior do que nas estações mais frias (outono/inverno) (Tabela 3). Garcia-Ispierto et al. (³²32 Garcia-Ispierto I, López-Gatius F, Santolaria, P, Yániz, J. L, Nogareda C, López-Béjar M, De Rensis F. Relationship between heat stress during the peri-implantation period and early fetal loss in dairy cattle. Theriogenology, Estados Unidos. 2006; 65(4), 799–807. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2005.06.011
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology... ) também avaliaram a influência do estresse térmico na PG, e observaram maior taxa de PG nos meses mais quentes quando comparados aos períodos mais frios. Segundo os autores, o ITU elevado durante a quarta semana de gestação pode impactar negativamente a taxa de prenhez e contribuir para a PG devido à sensibilidade do embrião ao estresse térmico durante o período de implantação. Nanas et al. (2021)(³³33 Nanas I, Chouzouris TM, Dovolou E, Dadouli K, Stamperna K, Kateri I, Barbagianni M, Amiridis S.G. Early embryo losses, progesterone and pregnancy associated glycoproteins levels during summer heat stress in dairy cows. Journal of thermal biology. 2021; 98, 102951. https://doi.org/10.1016/j.jtherbio.2021.102951
https://doi.org/10.1016/j.jtherbio.2021.... ) analisando vacas inseminadas artificialmente encontraram maior taxa de prenhez no inverno em comparação ao verão. Também encontraram maior PG no verão. Segundo os autores, esses resultados podem ser decorrentes principalmente da insuficiência lútea. Com base nisso, podemos inferir que o tratamento com GnRH após a TE não foi suficiente para prevenir PG durante o verão.

5. Conclusão

O tratamento com gonadorelina no momento da TE bovina aumentou a prenhez por transferência de embriões aos 30 e 60 dias e reduziu a perda de gestação. Além disso, vacas receptoras secas e lactantes apresentaram menor taxa de perda de gestação em comparação às novilhas, e a transferência de embriões realizada nas estações mais quentes do ano (primavera/verão) resultou em menor taxa de prenhez aos 60 dias e maior taxa de perda de gestação.

Agradecimentos

Agrademos o Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq, Bolsa de Produtividade em Pesquisa – R. M. Santos). Este estudo foi financiado em parte pela Coordenacão de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – Brasil (CAPES) – Código Financeiro 001.

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