LEUCOGRAMA E TEORES DE
PROTEÍNAS DE FASE AGUDA
Ricardo Perecin Nociti1,Thaís Gomes Rocha2,
Camila Franciosi2, Iggor Kallyl Tavares e Azevedo1, Paulo César da Silva3,
Kleber Tomas de Resende4, José Jurandir Fagliari5
1. Graduando da FCAV/UNESP/Campus de Jaboticabal - SP
2 . Pós-graduandas da FCAV/UNESP/Campus de Jaboticabal - SP
3. Laboratório de Apoio à Pesquisa do Departamento de Clínica e
Cirurgia Veterinária, FCAV/UNESP/Campus de Jaboticabal – SP
4. Docente do Departamento de Zootecnia da FCAV/UNESP/Campus de
Jaboticabal - SP
5. Docente do Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária da
FCAV/UNESP. Via de Acesso Prof. Paulo D. Castellane, s/n. CEP: 14884-900 –
Jaboticabal, SP, Brasil.
E-mail: fagliari@fcav.unesp.br (autor correspondente)
PALAVRAS-CHAVE: α1-glicoproteína ácida, biomarcador, ceruloplasmina, proteinograma, SDS-PAGE.
ABSTRACT
LEUCOGRAM AND ACUTE PHASE PROTEIN RESPONSE IN
YOUNG GOATS SUBMITTED TO ORCHIECTOMY AND DEHORNING
To determine the effects
of orchiectomy and dehorning in leukocyte count and serum acute phase protein
concentrations, blood samples were taken from 7 goats just before and 1, 2, 3,
5, 7, and 10 days after procedures. Results revealed a 30% increase in
leukocyte counts one day after orchiectomy and dehorning, followed by a gradual
decrease. On the tenth day, numbers were close to normal. Mean values for
concentration of serum protein fractions ranged between 30 and 33. The proteins
acting as acute phase proteins were ceruloplasmin,
haptoglobin, α1-acid glycoprotein and α1-antitrypsin, which continuously increased above 403% of its initial
levels. The other proteins also had a notoriously high increase, but by the end
of the experiment the values were almost equal to basal levels.
KEYWORDS: α1-acid glycoprotein biomarkers, ceruloplasmin,
proteinogram, SDS-PAGE.
INTRODUÇÃO
A
prática de orquiectomia é realizada pelos criadores de caprinos com o objetivo
de obter uniformidade da carcaça, em termos de qualidade, conservação e aspecto
da carne de animais destinados ao consumo humano (VIEIRA, 1995). A descorna
cosmética propicia boa aparência estética, principalmente, em animais de
exposição, além de facilitar o manejo do rebanho e exigir menor espaço no cocho
para a alimentação (VILLAGRAN & MATAMOROS, 1969).
Qualquer
procedimento cirúrgico aplicado aos animais induz resposta inflamatória aguda,
que representa um dos mecanismos de resposta imune inespecífica e envolve
mecanismos fisiopatológicos que interagem entre si com o intuito de minimizar a
lesão tecidual (ECKERSALL, 2000). Estudos em animais domésticos propiciado a
identificação de proteínas denominadas proteínas de fase aguda (PFA), cujas
concentrações plasmáticas aumentam precocemente nos processos inflamatórios,
traumas cirúrgicos e estresse (JAIN, 1993; ECKERSALL, 2004; MURATA et al.,
2004; MURATA, 2007). Estas proteínas foram consideradas indicadores potenciais
de doença e bem-estar em animais, individualmente, bem como da saúde do rebanho
(MURATA et al., 2004; PETERSEN et al., 2004).
Há
relato de efeito supressivo das proteínas de fase aguda α1-glicoproteína-ácida e haptoglobina na ação
linfocitária (MOTOI et al., 1992; MURATA & MIYAMATO, 1993). Verificou-se
aumento da concentração sérica de haptoglobina após orquiectomia em bezerros da
raça Holandesa (EARLEY & CROWE. 2002; TING et al., 2003), com retorno da
concentração desta proteína ao valor normal em 14 dias.
O objetivo desse trabalho foi determinar o
leucograma e o proteinograma sérico, em especial as proteínas de fase aguda, de
caprinos sadios com intuito de verificar sua importância como biomarcadores nos
procedimentos de castração e descorna.
MATERIAL
E MÉTODOS
Foram
utilizados sete cabritos machos sadios da raça Anglo-Nubiana pertencentes ao
Setor de Caprinocultura da Faculdade de Ciências Agrárias e
Veterinárias/UNESP/Campus de Jaboticabal. Amostras de 10 mL de sangue foram
obtidas por venopunção jugular em frascos contendo ácido
etilenodiaminotetracético (EDTA) e em frascos sem anticoagulante, imediatamente
antes de orquiectomia e descorna (M0) e 1 (M1), 2 (M2), 3 (M3), 5 (M4), 7 (M5)
e 10 (M6) dias após as cirurgias. A contagem de leucócitos foi realizada em
hemocitômetro automático (pocH-100iV Diff, Sysmex, Roche Diagnóstica, Brasil);
esfregaços sanguíneos corados pelo método de Rosenfeld foram confeccionados
para contagem diferencial de leucócitos (JAIN, 1986).
A
concentração sérica de proteína total foi determinada pelo método do biureto
utilizando-se conjunto de reagentes comerciais (Labtest Diagnóstica, Belo Horizonte,
Minas Gerais, Brasil).
Para a eletroforese em gel de poliacrilamida
contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) foi utilizada a técnica proposta
por LAEMMLI (1970) e como referências empregou-se solução marcadora com
diferentes pesos moleculares, além das proteínas purificadas haptoglobina,
ceruloplasmina e α1-antitripsina (Sigma, St Louis, MO, USA). A concentração das proteínas foi determinada
em densitômetro computadorizado (Shimadzu CS9301, Tóquio, Japão).
Em razão das características das variáveis avaliadas, optou-se pela análise descritiva dos dados.
RESULTADOS
E DISCUSSÃO
Os resultados obtidos são
apresentados na forma de médias e desvios padrão.
A contagem de leucócitos antes da
realização de orquiectomia e descorna (M0) foi 18,5±5,0 (x103/µL). Notou-se
aumento de 30% na contagem destas células no M1 (24,5±7,5 x103/µL),
seguindo-se redução gradual até o retorno a valores próximos à contagem basal,
no M6 (17,5±5,0 x103/µL).
Verificou-se que a contagem de neutrófilos segmentados no M0 foi 9,5±3,5 (x103/µL), com aumento de 10% em M1 (10,9±4,0 x103/µL) e redução na contagem
deste tipo celular até o M6 (7,5±3,5 x103/µL).
As contagens de neutrófilos bastonetes (
Os teores de proteína total
sofreram uma pequena redução, sendo o valor máximo verificado no M0 (5,4±0,4
g/dL), e o valor mínimo observado no M3 (5,1±0,5 g/dL). Notou-se aumento na
concentração de proteína total no M6 (5,2±0,6 g/dL), entretanto os teores
observados ao longo do experimento mantiveram-se inferiores aos valores de
referência para a espécie caprina (KANEKO et al., 2008).
No
eletroforetograma foram identificadas, em média 30 frações protéicas, sendo
neste estudo consideradas de interesse as proteínas de fase aguda
ceruloplasmina, α1-antitripsina,
haptoglobina e α1-glicoproteína
ácida.
Notou-se aumento gradativo na
concentração sérica de ceruloplasmina; no M3 (21,5±3,9 mg/dL) constatou-se teor
59% superior ao valor basal. No M6 (16,5±6,1 mg/dL) o teor desta proteína ainda
se mantinha 22% acima do valor basal verificado no M0 (13,5±5,7 mg/dL). A
concentração sérica de α1-antitripsina apresentou aumento contínuo
desde o M0 (38,9±103 mg/dL) até o M6 (196±135 mg/dL). Esta elevação na
concentração de α1-antitripsina representou aumento de 403%. FAGLIARI
et al. (2008), em estudo sobre laparotomia em eqüinos com abdômen agudo,
constataram aumento do teor de α1-antitripsina até o sétimo dia após
a cirurgia; no entanto, em menor intensidade do que aquele verificado nos
animais do presente experimento. No M0 a concentração sérica de haptoglobina
foi 10,9±3,4 mg/dL, aumentando 128% no M1 (24,9±36,1 mg/dL). Nos demais
momentos, notou-se variação nos teores desta proteína, de 8,35±4,64 mg/dL (M5)
a 13,4±5,39 mg/dL (M4). O teor de α1-glicoproteína ácida aumentou
gradativamente a partir do M0 (16,5±14,1 mg/dL), atingindo concentração máxima
no M2 (64,6±57,8 mg/dL), o que representou
um aumento de 290% quando comparado ao teor basal em M0. No M6, a
concentração desta proteína foi 17,6±24,5 mg/dL.
É interessante notar que o
decréscimo da contagem de linfócitos coincidiu com os valores máximos de α1-glicoproteína
ácida e de haptoglobina, semelhante aos achados de MOTOI et al. (1992) e MURATA & MIYAMATO
(1993).
CONCLUSÃO
A contagem de leucócitos e os teores séricos
haptoglobina apresentaram comportamento semelhante. As concentrações de ceruloplasmina
e α1-glicoproteína ácida
mantiveram-se aumentadas até o sétimo dia após os procedimentos, enquanto os
teores de α1-antitripsina
mantiveram-se elevados até 10 dias após a orquiectomia e descorna. Concluiu-se
que estas proteínas de fase aguda constituem bons marcadores da
recuperação dos animais, quando em associação com o leucograma, nos
procedimentos de orquiectomia e descorna em caprinos, entretanto, mais estudos são necessários para
maior esclarecimento.
REFERÊNCIAS
EARLEY, B.; CROWE, M. A. Effects of ketoprofen alone or in combination
with local anesthesia during the castration of bull calves on plasma cortisol,
immunological, and inflammatory responses. Journal of Animal Science,
Champaign, v. 80, p. 1044-1052, 2002.
ECKERSALL, P. D. Recent
advances and future prospects for the use of acute phase proteins as markers of
disease in animals. Revue de Médicine Vétérinaire, Toulouse, v. 151, p. 577-584, 2000.
ECKERSALL, P. D. The time
is right for acute phase proteins assays. The Veterinary Journal, London, v. 168, p. 3-5, 2004.
ECKERSALL, P. D.; CONNER,
J. G. Plasma haptoglobin in cattle (Bos taurus) exists as polymers in
association with albumin. Comparative Biochemistry and Physiology, New York, v. 96B, n. 2, p. 309-314,
1988.
Fagliari, J. J.; Silva, S. L.; Silva, P. C.; Pereira,
G. T. Leucograma
e teores plasmáticos de proteínas de fase aguda de eqüinos portadores de
abdômen agudo e submetidos à laparotomia Arquivo Brasileiro de Medicina
Veterinária e Zootecnia, Belo Horizonte, v. 60, n. 2, p. 322-328, 2008.
JAIN, N. C. Essentials
of veterinary hematology. Philadelphia: Lea & Febinger, 1993. 417p.
JAIN, N. C. Schalm's
veterinary hematology. 4.ed.
KANEKO, J.
J.; HARVEY, J. W.; BRUSS, M. L. Clinical biochemistry of domestic animals.
6.ed.
LAEMMLI, U. K. Cleavage
of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.
Nature, London, v.
227, p. 680-685, 1970.
MOTOI, Y. H.; ITOH, K.;
TAMURA, T.; MIYAMOTO, T.; OOHASHI.; NAGASAWA, S. Correlation of serum
concentration of alpha-1-acid glycoprotein with lymphocyte blastogenesis and
development of experimentally induced or naturally acquired hepatic-abscesses
in cattle. American Journal of
Veterinary Research, Chigaco, v. 53, p.574–579, 1992.
MURATA, H. Stress and
acute phase protein response: an inconspicuous but essential linkage. The
Veterinary Journal, London, v.
173, p. 473-474, 2007.
MURATA, H., SHIMADA, N.,
YOSHIOKA, M. Current research on acute phase proteins in veterinary diagnosis:
an overview. The Veterinary Journal, London, v. 168, p. 28–40, 2004.
MURATA, H.; MIYAMOTO, T.
Bovine haptoglobin as a possible immunomodulator in the sera of transported
calves. The Veterinary Journal, London,
v. 149, p. 277–283, 1993.
PETERSEN, H. H.; NIELSEN,
J. P.; HEEGAARD, P. M. H. Application of acute phase protein measurements in
veterinary clinical chemistry. Veterinary Research,
THRALL, M. A. Hematologia e bioquímica clínica veterinária. São Paulo: Roca,
2007. 592p.
TING, S. T. L.; EARLEY,
B.; HUGHES, J. M. L.; CROWE, M. A.
Effect of ketoprofen, lidocaine local anesthesia, and combined xylazine and
lidocainecaudal epidural anesthesia during castration of beef cattle on stress
responses, immunity, growth, and behavior. Journal of Animal Science, Champaign, v. 81, p. 1281-1293, 2003.
VIEIRA, L. I. Criação de cabras: técnica
prática e lucrativa. São Paulo: Câmara Brasileira do Livro. (1995).