NÍVEIS DE SUBSTÂNCIAS REATIVAS AO ÁCIDO
TIOBARBITÚRICO (TBARS)
Andreza
Amaral da Silva1, Danilo Otávio Laurenti Ferreira2,
Bianca Paola Santarosa3, Débora Cristina Damasceno4,
Adriano Dias5, Roberto Calderon Gonçalves6
1. Médica Veterinária, MS, Doutoranda
Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de
Medicina Veterinária e Zootecnia - UNESP - Campus de Botucatu, Distrito de
Rubião Júnior, S/N - CEP: 18.618-000 - Botucatu/SP - Brasil.
E-mail: andrezamedvet@yahoo.com.br (autor para
correspondência)
2. Médico Veterinário, Mestrando
3. Acadêmico do Curso de Medicina Veterinária,
Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia de Botucatu - UNESP.
4. Bióloga, MS, Dra., Profa. Ass. do Departamento de
Ginecologia e Obstetrícia da Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP.
5. Fonoaudiólogo, MS, Dr., Prof. Ass. do Departamento
de Saúde Pública da Faculdade de Medicina de Botucatu -UNESP.
6. Médico Veterinário, MS, Dr., Prof. Ass. do
Departamento de Clínica Veterinária da Faculdade de Medicina Veterinária e
Zootecnia de Botucatu - UNESP.
PALAVRAS-CHAVE: Estresse oxidativo, liperoxidação, radicais livres.
ABSTRACT
LEVELS OF THIOBARBITURIC ACID-REACTIVE COMPOUNDS IN ERYTHROCYTES FROM
SHEEP SUBMITTED TO LUNG BIOPSY
This study evaluates the effect of
percutaneous transthoracic lung biopsy on the concentration of Thiobarbituric
acid reactive substances (TBARS) in erythrocytes from sheep. A total of 20
clinically healthy animals were investigated. Jugular blood samples (5mL) were
collected in heparin tubes before and thirty minutes after the lung biopsy, and
were stored at
KEYWORDS:
Free radicals, lipoperoxidation, oxidative stress.
INTRODUÇÃO
A formação de radicais livres in vivo ocorre via ação catalítica de enzimas, durante os processos de transferência de elétrons que ocorrem no metabolismo celular normal, como na reação inflamatória, por exemplo. Contudo, a concentração desses radicais pode aumentar devido à maior geração intracelular ou pela deficiência dos mecanismos antioxidantes. O desequilíbrio entre moléculas oxidantes e antioxidantes que resulta na indução de danos celulares pelos radicais livres é chamado de estresse oxidativo (KIRSCHIVINK & LEUKEUX, 2005; VALKO et al., 2007), e tem sido relacionado com a etiologia e curso de várias doenças, inclusive enfermidades do trato respiratório de animais (ART et al., 1999; KIRSCHIVINK et al., 2002; DEATON et al., 2004).
Entre os principais danos celulares causados por esses radicais está a oxidação dos lipídios das membranas celulares, levando à perda da fluidez e aumento da permeabilidade das membranas, com liberação de nutrientes e substâncias tóxicas à célula no espaço extracelular, e até mesmo sua ruptura (FERREIRA & MATSUBARA, 1997; DAMASCENO et al., 2002). As substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) são um dos principais marcadores biológicos desse tipo de lesão em membranas celulares (DRAPER & HADLEY, 1990).
Atualmente a biopsia pulmonar vem sendo empregada como auxílio diagnóstico, com efetividade confirmada na obtenção de fragmentos adequados para o exame histopatológico e microbiológico (PORTO, 1991), inclusive na espécie ovina (BRAUN et al., 2000). Por ser um método diagnóstico invasivo, é possível que a biopsia pulmonar resulte em resposta inflamatória aguda acarretando aumento na produção de radicais livres pelas células fagocíticas durante a explosão respiratória, o que implicaria em danos celulares e teciduais graves se esse processo não for controlado. Diante disso, este estudo teve por objetivo avaliar o efeito da biopsia pulmonar transtorácica percutânea sobre as concentrações eritrocitárias de TBARS em ovinos clinicamente sadios.
MATERIAL E MÉTODOS
Foram utilizados 20 ovinos
clinicamente sadios destinados ao abate. Com os animais manualmente contidos,
foram coletados 5 mL de sangue da veia jugular em tubos de ensaio
heparinizados. Após a colheita foi realizada a biopsia pulmonar com agulha semi-automática
(EuromedÒ,
BD - 14 X
No laboratório, as amostras de
sangue foram centrifugadas a 185 x g por 10 minutos à 4º C. Para obtenção das
hemácias, o sangue foi lavado com tampão-salina-fosfato (PBS) a mesma
temperatura e centrifugado a 1575 x g durante 15 minutos por três vezes.
A cada repetição do procedimento retirou-se o plasma, glóbulos brancos e as
plaquetas, por aspiração com micropipeta. Às hemácias lavadas (50 mL)
foram adicionados 950 mL de água deionizada e agitados, por inversão, para
obtenção do hemolisado, que foi utilizado para determinação das TBARS através
de um método colorimétrico previamente descrito (FERREIRA et al., 1999). A
análise estatística dos resultados foi realizada utilizando-se o teste de Wilcoxon,
para amostras relacionadas sendo significativo quando p≤ 0,05.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Trinta minutos após a biopsia pulmonar não foi verificada alteração estatisticamente significativa nas concentrações de TBARS [221,978 ± 77,37 (p = 0,135)] em hemácias de ovinos clinicamente sadios.
As reações inflamatórias locais são
caracterizadas por aumento do fluxo sangüíneo e da permeabilidade vascular,
dilatação dos vasos e acúmulo de células do processo inflamatório. As
principais células envolvidas na fase aguda da inflamação são os neutrófilos,
enquanto que, na fase tardia, monócitos/macrófagos e algumas linhagens de
linfócitos migram para o sítio inflamatório. Essas células produzem radicais
livres durante a explosão respiratória como reação aos estímulos fagocíticos.
Além disso, vários aspectos do processo inflamatório são regulados por
mediadores produzidos por células do sistema imune e células endoteliais, como
citocinas, histamina, leucotrienos, prostaglandinas e, também, radicais livres
(HUERRE & GOUNON, 1996).
Segundo MCINTYRE et al. (1997), a extensão dos eventos inflamatórios e das injúrias eventualmente provocadas por eles está diretamente relacionada à intensidade do estímulo inicial e aos mecanismos imunológicos que são ativados durante o processo. A agressão física tecidual ocorrida durante a introdução da agulha de biopsia deflagrou a resposta inflamatória e a liberação de mediadores químicos, exacerbando-a nos momentos que se seguiram.
Como a biopsia pulmonar transtorácica percutânea não induziu a
peroxidação lipídica, confirmado pela não alteração dos valores de TBARS nas
hemácias dos animais 30 minutos após o procedimento, os
resultados deste estudo nos levam a crer que a biopsia pulmonar não leva a
produção de radicais livres em quantidade suficientes para provocar lesões em
nível de membrana celular, podendo ser amplamente utilizada na rotina
veterinária.
Alguns autores defendem que, para uma melhor interpretação dos resultados de estudos que envolvem estresse oxidativo, outros fatores tais como o tipo de marcador utilizado, a metodologia empregada, o tecido estudado e, principalmente, o momento no qual o marcador foi investigado, sejam criteriosamente considerados (WITT et al., 1992; VOLLARD et al., 2005). Portanto, o fato de que sinais de peroxidação lipídica não tenham sido observados, com base no marcador utilizado, até 30 minutos após a biopsia pulmonar, não exclui a possibilidade de que a peroxidação lipídica tenha ocorrido em outro momento durante a recuperação dos animais.
Com base nessa conjectura, talvez uma avaliação seriada e mais duradoura das concentrações das TBARS revelasse alterações compatíveis com peroxidação lipídica, ainda ocultas 30 minutos após o procedimento.
CONCLUSÕES
A biopsia pulmonar transtorácica percutânea não causou alterações significativas no metabolismo oxidativo, medido por determinação das TBARS, podendo ser amplamente utilizada em ovinos sem que ocorram danos teciduais expressivos até 30 minutos após o procedimento.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem ao auxílio financeiro e a bolsa de estudos de mestrado concedida pela Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo – FAPESP.
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